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                      成功案例
                      MCAO模型在體實驗相關研究

                      時間:2020-08-05 10:38:00 瀏覽:3849次


                      一、實驗動物

                      選擇SPF SD大鼠,6~8w,體重250-280 g,雄性。

                      二、實驗步驟

                      1、動物適應性喂養

                      動物保持12h-12h晝夜交替,自由飲水、進食,溫度23-25,適應性喂養一周后進入實驗。

                      2、SD大鼠MCAO模型構建

                      參照Longa線栓法阻塞大鼠右側大腦中動脈(MCA),建立急性局部腦缺血再灌注模型。具體步驟為:大鼠稱重,7%水合氯醛(0.5ml/100g)腹腔注射麻醉,頸前部備皮、消毒,然后將大鼠仰臥放置于操作臺上,鈍性分離右側皮下組織及肌肉暴露出頸總動脈,眼科鑷小心分離伴行于頸總動脈的迷走神經及動脈周圍粘膜組織。繼續向頭部分離,小心剔除覆蓋于動脈上方的粘膜組織,可見頸外動脈、頸內動脈與頸總動脈呈Y”字形分布,游離出獨立的頸內、外動脈。頸外動脈遠心端結扎(用燒燙的鑷子熔斷遠心端便于插入栓線),近心端埋線以備結扎拴線,再用微動脈夾夾閉頸總動脈近心端和頸內動脈遠心端,用顯微外科剪將頸外動脈剪一小口,將栓線由頸外動脈切口處插入頸內動脈,用預先埋線結扎頸外動脈防止出血,松開微動脈夾,將栓線送入顱內,有明顯的阻力感,表明栓線已插入MCA,局部腦缺血模型即告成功。醫用棉簽清理頸部血塊,縫合皮膚,酒精棉球消毒,將大鼠放回籠子。

                      插線成功即為腦缺血開始,將栓線輕柔退致頸外動脈處,即為再灌注開始。術后動態觀察大鼠的反應。麻醉后保溫致動物蘇醒,肛溫36.5±0.5℃。



                      3、腦室給藥

                      實驗鼠頭部備皮后固定于腦立體定位儀,頭頂皮膚消毒,沿中線切開頭皮,剝離筋膜,標記前囟,穿刺點位于矢狀縫右旁1mm,冠狀縫后1.5mm,進針深度1.5mm。高速顱骨鉆于右側腦室注射部位正上方鉆穿顱骨,插入微量注射器,緩慢注入藥液,注射完畢后留針數分鐘,緩慢移出注射器,涂抹骨蠟,縫合外皮,完成腦定位注射。



                      4、建模后神經功能缺損評分以及TTC染色檢測腦梗死灶分布

                      參照Zea Longa 5級神經功能缺損評分法對大鼠進行神經功能評分。0分:無神經功能缺損;1分:輕度局灶神經功能缺陷(不能完全伸展缺血對側前肢);2分:中度局灶神經功能缺陷(向缺血對側轉圈);3分:重度局灶神經功能缺陷(向缺血對側傾倒);4分:不能自發行走,昏睡。

                      第一次評分:篩選神經功能評分在1-3分的大鼠納入實驗對象,剔除神經功能評分為0分和4分的大鼠。

                      第二次評分:于取材前進行評分記錄各組間大鼠神經功能評分的差異。


                      5、WB 法檢測相關蛋白指標表達


                      根據如下實驗結果可見,與正常對照相比,A蛋白在模型組中表達增加,經過藥物干預后表達降低。

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