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                      威斯騰公眾號

                      CRISPR/Cas9細胞敲除/入
                      細胞系基因靶向操作服務

                      時間:2020-07-17 16:42:00 瀏覽:5261次


                      基因敲除敲入技術一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯騰生物利用最新的CRISPR/Cas系統可以有效的實現對細胞系特定基因的敲除和定點突變。


                      技術原理

                      Clustered Regularly Interspaced Short PalindromicRepeats(CRISPR)/Cas是細菌和古細菌不斷進化而獲得的免疫防御機制,其中II型CRISPR/Cas免疫系統依賴Cas9內切酶家族靶向和剪切外源DNA。CRISPR/Cas9系統通過小導向RNA(sgRNA)對切割區域進行識別,進而利用Cas9內切酶實現靶向區域的切割以產生DNA雙鏈斷裂。該系統靈活簡單,可實現多個靶點的同時操作。目前我們采用Double Nicking技術,顯著降低脫靶率。

                      我們利用該技術,定點敲除和修飾各種細胞系中的特定基因。對打靶細胞進行藥物篩選,利用CRISPR/Cas系統獲得的基因敲除細胞的剔除效率會明顯高于常規的利用RNAi和shRNA介導的基因敲落。

                      技術特色
                      1. 可實現多個靶基因位點及多個基因的同時敲除
                      2. 最新Nickase酶/雙gRNA技術,顯著降低脫靶率
                      3. 無種屬限制,適用于各種細胞系的靶向敲除
                      4. 服務周期短,2個月即可交付陽性細胞
                      服務內容
                      靶向目標序列gRNA的設計及載體構建
                      目標細胞系共轉染
                      陽性細胞株的篩選和鑒定

                      應用范疇
                      基因功能分析:在細胞水平研究基因的功能
                      定點突變::建立點突變細胞,可用于藥物靶點研究。
                      啟動子功能分析:該方法建立的啟動子分析系統,可有效地分析內源性啟動子的強度,是一種最理想的分析系統。

                      服務流程



                      本平臺可制備的動物模型(部分)


                      疾病 方法 動物 模型成功率 操作難度 耗時程度
                      帕金森疾病 6-OHDA腦立體定位注射 Rat 70%~80% 簡單 比較耗時
                      MPTP、IP或SC注射(急性or慢性) Mouse 70% 簡單 快速
                      抑郁癥 禁食、禁水、夾尾、冰水等慢性不可知刺激 Rat 80% 簡單 非常耗時
                      利血平藥物注射或者懸尾和強迫游泳 Mouse 60% 簡單 非常耗時
                      脊髓損傷 脊髓半切、全斷、牽張、擠壓、打擊等 Rat 80% 普通 非常耗時
                      腦外損傷 顱腦損傷儀打擊致損 Rat 80% 普通 比較耗時
                      坐骨神經損傷
                      (周圍神經損傷)
                      切斷或者夾閉神經(手術) Rat 90% 簡單 一般
                      心肌缺血 心臟冠狀動脈左前降支結扎 Rat 60%~70% 較難 非常耗時
                      心力衰竭 腹主動脈縮窄手術致心力衰竭 Rat 90% 簡單 快速
                      肺動脈高壓 手術分流術和MCT IP或SC注射 Rat 80% 普通 一般
                      高血壓 單腎單夾腎血管或者兩腎一夾型腎血管 Rat 80% 簡單 快速
                      粥樣動脈硬化 高脂飲食+VD3喂養 Rat/Mouse 50% 簡單 非常耗時
                      大腦中動脈阻塞(MCAO) 線栓法制備 Rat 70% 普通 比較耗時
                      慢性支氣管炎 煙熏 Rat 80% 簡單 耗時
                      過敏性哮喘 OVA+氫氧化鋁致敏 Rat/Mouse 80% 普通 耗時
                      肺炎模型 鮑曼不動桿菌氣道滴注 Rat/Mouse 90% 簡單 快速
                      肝炎—肝硬化—肝癌 DEN誘導 Rat 80% 簡單 比較耗時
                      肝纖維化 CCL4誘導 Rat 80% 簡單 耗時
                      膽結石模型 喂養致石飼料 Mouse 90% 簡單 一般
                      急性胰腺炎 牛黃膽酸鈉胰膽管注射 Rat 90% 普通 快速
                      急性腎衰竭 順鉑尾靜脈注射/腎動脈缺血 Rat 80% 普通 一般
                      體內血栓 手術或者藥物誘導 Mouse 60-70% 普通 比較耗時
                      關節炎模型 Ⅱ型膠原+佐劑誘導 Rat/Mouse 90% 簡單 一般
                      Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病 STZ或增加高脂飼料喂養藥物誘導 Rat/Mouse 80% 簡單 比較耗時
                      荷瘤鼠/裸鼠成瘤 皮下成瘤 BALB/cA-nu mice 90% 簡單 一般
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